انتقال ژن cry3a به یونجه (medicago sativa l) برای ایجاد مقاومت به سرخرطومی یونجه (hypera postica gyll) به کمک اگروباکتریوم

پایان نامه
  • وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تبریز
  • نویسنده ناصر زارع
  • استاد راهنما مسعود توحیدفر
  • تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
  • سال انتشار 1388
چکیده

یونجه (medicago sativa l.) یکی از گیاهان علوفهای مهم است که به خاطر داشتن پروتئین و ارزش غذایی بالا نقش بسزایی در تغذیه دام دارد. علیرغم فعالیت های مدیریتی بهتر، امروزه آفات بخش قابل توجهی از محصولات کشاورزی (13%) را از بین برده و باعث کاهش کیفیت محصول می شوند. علاوه بر این، سموم مورد استفاده برای کنترل آفات دارای اثرات نامطلوبی بر سلامت انسان و محیط زیست هستند. سرخرطومی یونجه (hypera postica gyll.) آفت مهم یونجه در ایران و جهان است و در ایران خسارت ناشی از این آفت 33% برآورد شده است. این تحقیق به منظور انتقال ژن cry3a به یونجه برای ایجاد مقاومت به آفت سرخرطومی صورت گرفت. با توجه به اینکه اولین گام برای دستکاری ژنتیکی این گیاه، بهینه سازی یک سیستم موثر باززایی درون شیشه ای و بدست آوردن ژنوتیپ هایی با قابلیت باززایی بالا است، ابتدا پاسخ جنین زایی دو جداکشت برگ و دمبرگ پنج رقم یونجه ایرانی با استفاده از شش پروتکل مختلف مورد ارزیابی قرار گرفت. با دو پروتکل iv و vi هر دو جداکشت برگ و دمبرگ کالوس های حاوی جنین سوماتیکی تولید کردند. درصد جنین زایی و تعداد جنین در جداکشت بسته به ژنوتیپ، پروتکل و جداکشت مورد استفاده به ترتیب از صفر تا 12 درصد و صفر تا 5/16 عدد متغیر بود. به منظور گزینش ژنوتیپ های دارای قابلیت جنین زایی بالا، پاسخ جنین زایی 29-21 ژنوتیپ (گیاه) از هر پنج رقم بااستفاده از پروتکل vi مورد ارزیابی قرار گرفت. به طور کلی، 5/10 درصد از ژنوتیپ های مورد ارزیابی قابلیت جنین زایی سوماتیکی را داشتند و سه ژنوتیپ قره یونجه-مراغه-27 (km-27)، قره یونجه-قره قزلو-14 (kk-14) و سینتتیک-18 (syn-18) که قابلیت باززایی بالایی نسبت به بقیه داشتند برای مطالعه بیشتر و بهینه سازی انتقال ژن انتخاب شدند. در این تحقیق، ژن cry3a با استفاده از فناوری dna نوترکیب در ناقل بیانی گیاهی pbi121 تحت راه انداز camv 35s و خاتمه دهنده nos قرار گرفت و برای انتقال به ژنوتیپ های گزینش شده یونجه مورد استفاده قرار گرفت. برای این منظور پاسخ تراریختی دو جداکشت برگ و دمبرگ سه ژنوتیپ گزینش شده به سه سویه اگروباکتری lba4404، agl01 و gv3101 با زمان های مختلف هم کشتی و حضور استوسیرینگون در سوسپانسیون تلقیح مورد ارزیابی قرار گرفت. تعداد 21 جداکشت از جداکشت های مربوط به چهار و هشت روز هم کشتی، جنین های سوماتیکی مقاوم به کانامایسین تولید کردند که همه این جداکشت ها متعلق به ژنوتیپ های km-27 و kk-14 تلقیح شده با سویه های lba4404 و agl01 بودند. متوسط کارایی تراریختی دو جداکشت از دو ژنوتیپkm-27 و kk-14 با سویه های lba4404 و agl01 بر اساس تعداد گیاهان مقاوم به کانامایسین برابر 21/1 درصد بود. کارآیی تراریختی سویه های اگروباکتریوم مورد استفاده متفاوت و فراوانی تراریختی (درصد جداکشت های حاوی جنین های سوماتیکی مقاوم به کانامایسین) حاصل از سویه lba4404 بیشتر از دو سویه دیگر بود. تجزیه pcr با آغازگرهای اختصاصی ژن cry3a، حضور تراژن در 85% گیاهان مقاوم به کانامایسین را نشان داد. بررسی دورگ سازی سادرن در یکی از لاین های تراریخت نیز نشان داد که ژن cry3a در ژنوم این لاین در سه جایگاه مختلف تلفیق شده است. تجزیه لاین های تراریخت با استفاده از روش داس الایزا، بیان پروتئین cry3a در برگ گیاهان تراریخت را نشان داد. زیست سنجی گیاهان تراریخت با آفت سرخرطومی یونجه نشان داد که مقاومت لاین های تراریخت در برابر این آفت افزایش یافته است.

۱۵ صفحه ی اول

برای دانلود 15 صفحه اول باید عضویت طلایی داشته باشید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

تنوع خصوصیات مختلف مرتبط با مقاومت مزرعه ای در ژنوتیپ های مختلف یونجه (medicago sativa l.) نسبت به سرخرطومی برگ یونجه (hypera postica gyll.)

سرخرطومی برگ یونجه آفت درجه یک تمام مناطق یونجه کاری ایران و جهان است. با کاربرد ارقام مقاوم، خسارت کاهش می یابد. در بررسی مقاومت مزرعه­ای 42 ژنوتیپ  یونجه موجود در ژرم پلاسم نسبت به این آفت معلوم شد که، ژنوتیپ­ها، اثرات معنی داری روی  تعداد لارو، میزان خسارت، وضعیت سبزینه، عملکرد تر علوفه و همچنین سایر صفات داشتند. رگرسیون گام به گام برای میزان خسارت به عنوان متغیر تابع معلوم کرد که تعداد لارو...

متن کامل

مطالعه تنوع ژنتیکی، قابلیت توارث و روابط همبستگی مرتبط با خسارت به سرخرطومی برگ (Hypera postica Gyll.) در ژرم‌پلاسم یونجه (Medicago sativa L.)

به منظور تعیین همبستگی بین صفات مختلف زراعی و مطالعه روابط بین آن­ها به کمک تجزیه رگرسیون، 46 جمعیت یونجه زراعی موجود در ژرم­پلاسم مزرعه تحقیقاتی دانشکده کشاورزی دانشگاه بوعلی­سینا در سال 1391 مورد مطالعه قرار گرفتند. تجزیه واریانس برای صفات مختلف معلوم کرد که تفاوت جمعیت­ها برای صفات عملکرد علوفه خشک و تعداد لارو در سطح احتمال 1 درصد معنی­دار بود. . ضرایب همبستگی ژنوتیپی عملکرد تر علوفه با مقد...

متن کامل

بررسی پروفـیل باندهای ساپونـین های برگ ۳ رقم یونـجه (medicago sativa l.) با مقاومت های متفاوت نسبت به سرخرطومی برگ یونجه (hypera postica gyll.) با به کارگیری tlc

ساپونین­ های تری­ترپنوئیدی یونجه متابولیت­ های ثانویه ­ای هستند که باعث تلخی گیاه، پایین آمدن خوش خوراکی، مقاوم شدن گیاه به حمله آفات و بسیاری از بیماری­ ها می­شوند. ساپونین­ ها همانند گلیکوزید­ها بخشی از گروه استروئید را تشکیل می­ دهند. در این پژوهش، تنوع ساپونین در ارقام مختلفی از  گیاه یونجه که مقاومت­ های متفاوتی در ژرم­ پلاسم مزرعه نسبت به سرخرطومی برگ یونجه نشان داده بودند، از طریق کرومات...

متن کامل

مطالعه سازوکارهای مقاومت و بیان پروتئین ژنوتیپ‌های غربال‌شده از ژرم‌پلاسم مزرعه‌ای یونجه نسبت به سرخرطومی برگ یونجه (Hypera postica Gyll. (Col.: Curculionidae

سرخرطومی برگ یونجه Hypera postica Gyll از جمله آفات مهمی است که هر ساله عملکرد علوفه گیاه یونجه را تحت تأثیر قرار داده و چین اول آن را به‌طور کامل از بین می­برد. در این مطالعه سازوکارهای آنتی­زنوز، آنتی­بیوز و تحمل 16 ژنوتیپ حاصل از نتایج غربال مزرعه­ای در گلخانه با نوسان دمای شبانه­روز بین 18 تا 27 درجه سلسیوس در فروردین و اردیبهشت 1393 در قالب طرح کاملاً تصادفی و با چهار تکرار مورد بررسی قرار ...

متن کامل

تنوع مقاومت نسبت به حمله سرخرطومی برگ یونجه در ژنوتیپ های مختلف یونجه (hypera postica gyll.) در شرایط همدان

یونجه از جمله گیاهان علوفه ­ای دنیا (به ویژه ایران) می­ باشد. هرساله عملکرد این گیاه در منطقه همدان توسط حمله خسارت­ زای سرخرطومی کاهش می­یابد. بنابراین، به­ منظور ارزیابی مقاومت به آفت فوق در ژنوتیپ­ های مختلف این گیاه، 30 جمعیت یونجه زراعی موجود در ژرم­پلاسم مزرعه ­ای با آرایش طرح کاملاً تصادفی در منطقه همدان مورد مطالعه قرار گرفتند. نتایج تجزیه واریانس صفات مورد بررسی، تنوع فراوانی از نظر کلی...

متن کامل

بررسی تنوع ساپونین دریونجه های(medicago sativa l.)حساس، نیمه حساس و مقاوم به لارو سرخرطومی برگ یونجه (hypera postica gyll.) با کمک تکنیک کروماتوگرافی لایه نازک

این پژوهش به صورت مطالعات مزرعه ای وآزمایشگاهی صورت پذیرفت. هدف از مطالعه مزرعه ای، گروه بندی مقاومت به آفت در یونجه های زراعی (medicago sativa l.) بود, صفات مختلف در 30 ژنوتیپ یونجه غربال شده از ژرم پلاسم، در قالب طرح کاملاً تصادفی مورد ارزیابی قرار گرفتند. تجزیه واریانس تنوع ژنتیکی قابل توجهی در بین ژنوتیپ ها برای صفات مورد بررسی در شرایط زمانی حمله آفت را نشان داد. اثرات ژنوتیپ ها با درجات مت...

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تبریز

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023